描述

ZeroBlunt®TOPO®PCR克隆試劑盒提供高效的5分鐘一步克隆策略（“TOPO®克隆”），用于將校正熱穩(wěn)定聚合酶擴增的平端PCR產(chǎn)物直接插入質(zhì)粒載體中。每個試劑盒都含有用于陽性選擇的含有ccd B基因的ZeroBlunt®TOPO®載體（見圖），僅允許具有重組體的質(zhì)粒載體生長。Zero®Blunt®TOPO®試劑盒可根據(jù)您的需求和預算，提供各種感受態(tài)細胞或不含感受態(tài)細胞。Zero®Blunt®TOPO®PCR克隆試劑盒的特點：

快速簡便 - 只需3個步驟即可從PCR到克隆，只需5分鐘的手動操作時間 - 
高效 -通過正確的插入獲得高達95％的克隆經(jīng)過十多年的引用
證明 -可靠的性能超過4,000次引用
簡單 -無需連接酶，PCR后程序或含有特定序列的PCR引物。

ZeroBlunt®TOPO®克隆試劑盒 - 概述

載體： pCR™Blunt II-TOPO®載體 - 含有ccd B基因，可直接選擇重組體

克隆方法： TOPO®克隆 - 拓撲異構酶I基，5分鐘鈍化連接用校正熱穩(wěn)定聚合酶擴增的PCR產(chǎn)物

感受態(tài)細胞：多種選擇 - 從具有通用，高效，噬菌體T1抗性，快速生長的感受態(tài)細胞的試劑盒中選擇，或使用您自己的。

的pCR™鈍II-TOPO®矢量設計為校正活性的聚合酶
在PCR™鈍II-TOPO？載體是設計用來克隆通過熱穩(wěn)定的校正活性的聚合酶如產(chǎn)生的Platinum®平端PCR產(chǎn)物的Pfx DNA聚合酶。pCR™Blunt II-TOPO®載體包含：

•位于PCR產(chǎn)物插入位點側翼的EcoRI位點，可輕松切除插入物
•卡那霉素和Zeocin™抗性基因可供您選擇在大腸桿菌中選擇
•SP6啟動子/引物位點用于體外 RNA轉(zhuǎn)錄和測序
•用于測序或PCR篩選的M13正向和反向引物位點

pCR™Blunt II-TOPO®克隆選擇
pCR TM -Blunt II-TOPO允許通過破壞致死的大腸桿菌基因ccd B 直接選擇重組體。載體含有與LacZα片段的C末端融合的ccd B基因。平末端PCR產(chǎn)物的連接破壞了LacZα- ccd B基因融合體的表達，允許轉(zhuǎn)化后僅陽性重組體的生長。含有非重組載體的細胞在接種后被殺死。因此，不需要藍/白篩選。

簡化的基于TOPO®的克隆
使用TOPO®克隆技術，不需要含有特定序列的PCR引物，PCR后程序，載體制備或其他時間密集的DNA操作步驟。只需將PCR反應直接添加到提供的拓撲異構酶電荷載體中，孵育5分鐘，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞。

高效克隆
高達95％的克隆攜帶所需的插入物，您可以篩選更少的克隆，節(jié)省您的時間和金錢。該試劑盒中使用的pCR™Blunt II-TOPO®載體含有致死的ccd B基因，可有效選擇由熱穩(wěn)定校正聚合酶產(chǎn)生的平端PCR重組產(chǎn)物。

克隆的標準
在克隆方面，TOPO®克隆技術十多年來一直是數(shù)千名科學家的可靠合作伙伴。TOPO®克隆快速，簡單易用且高效，已應用于許多不同的載體，適用于各種應用。

ZeroBlunt®TOPO®PCRCloning®試劑盒選項
用于將平端PCR產(chǎn)物直接插入質(zhì)粒載體的ZeroBlunt®TOPO®PCR克隆試劑盒可與各種感受態(tài)細胞一起購買，根據(jù)您的需要提供不同的優(yōu)勢：

一般克?。?0細胞（目錄號K2800-20，K2800-40）
高效克?。?0 Electrocomp™細胞（目錄號K2860-01，K2860-40）
一般克隆，噬菌體T1抗性：DH5α-T1R （貨號：K2820-20，K2820-40）
快速增長：Mach1™-T1R具有化學競爭力的大腸桿菌（目錄號K2830-20）
提供您自己的產(chǎn)品：靈活性和省錢（目錄號450254）

我們還提供包含PureLink的套件版本®快速質(zhì)粒微量制備試劑盒（目錄號K2800-02），用于分離干凈，可測序的重組質(zhì)粒