核酸服務(wù)

一、核酸的提取與純化

1、RNA的提取

新鮮組織提取效果佳，其次為液氮和-70℃及組織RNA保存液中保存的樣本，不推薦 使用-20℃及以下溫度下保存的樣本。

細(xì)菌用量：1-2ml ，需要新鮮培養(yǎng)（公司可代為培養(yǎng)，另行收費）。

植物用量：500mg ，需要新鮮植物葉片。

細(xì)胞用量： 10 5 -10 6 ，需要新鮮培養(yǎng)（公司可代為培養(yǎng),另行收費）。

組織用量： 500mg ，需要新鮮標(biāo)本或凍存在液氮罐中的標(biāo)本。

血液用量： 5ml ，需要新鮮標(biāo)本或凍存在液氮罐中的標(biāo)本。

2、Genomic DNA的提取

新鮮組織提取效果佳，其次為液氮和-70℃保存的樣本，-20℃不宜長期保存樣本，否則提取的DNA長度較短。

細(xì)菌用量： 10ml收集液，需要新鮮或 -20 ℃保存標(biāo)本。

植物用量：葉片100mg，需要新鮮或 -20 ℃保存標(biāo)本。

細(xì)胞用量： 10 5 -10 6，需要新鮮或 -20 ℃保存標(biāo)本。

組織用量： 25mg ，需要新鮮或 -20 ℃保存標(biāo)本。

血液用量： 5ml ，需要新鮮標(biāo)本或凍存在液氮罐中的標(biāo)本。

酵母用量：10 5 -10 6 或10ml液體培養(yǎng)物，需要新鮮或 -20 ℃保存標(biāo)本。

3、質(zhì)粒 DNA 的小量 / 中量 / 大量提取

高拷貝質(zhì)粒： 10ml 菌液， 25-50 μ g

低拷貝質(zhì)粒： 20ml 菌液， 15-30 μ g

高拷貝質(zhì)粒： 100-200ml 菌液， 500-1000 μ g

低拷貝質(zhì)粒： 100-200ml 菌液， 500-800 μ g

10ml 菌液， 25-50 μ g

二、PCR及RT-PCR

1、PCR擴(kuò)增條件的優(yōu)化

客戶提供模板（可代提?。┖鸵铮纱铣桑?/p>

2、常規(guī)PCR實驗

客戶提供模板（可代提取）和引物（可代合成）

客戶提供模板（可代提?。┖鸵铮纱铣桑?/p>

客戶提供模板（可代提取）和引物（可代合成）

3、引物的設(shè)計與合成

采用兩套以上的軟件設(shè)計，保證引物的可靠性。請用戶提供相應(yīng)

的模板序列，通過 傳送。

OPC ，PAGE，HPLC純化

4、RNA 的反轉(zhuǎn)錄及 PCR 擴(kuò)增

由用戶提供新鮮制備的模板（可代提?。?/p>

由用戶提供引物（可代合成）

三、熒光定量PCR
 

服務(wù)項目：

常規(guī)定性分析：

通過終點法分析樣本中把序列的陰性/陽性，在終點讀板鑒定的同時對擴(kuò)增過程進(jìn)行全程跟蹤，可及時發(fā)現(xiàn)樣本污

染、假陽性、“弱陽性”等情況，是目前病原體檢測等臨床應(yīng)用的佳選擇。同時也是科學(xué)研究領(lǐng)域的重要應(yīng)用技術(shù)。

相對定量：

通過對不同樣本靶基因的表達(dá)或含量進(jìn)行檢測，可以判斷不同樣本間靶基因表達(dá)的相對高低，是對不同樣本相

同靶基因表達(dá)情況的“比較”。

定量：

合成一個和某靶基因具有相同序列的片段（或構(gòu)建載體）作為標(biāo)準(zhǔn)品，通過測量OD值便可以計算出標(biāo)準(zhǔn)品的摩

爾濃度，不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品在相同體系（即相同擴(kuò)增效率）下對應(yīng)的ct值具有高度的*性和良好的重復(fù)性，可以

作為該基因的“標(biāo)尺”。通過對未知樣本中該靶基因ct值的檢測，便可由“標(biāo)尺”測算出未知樣本中靶基因的摩爾

濃度。達(dá)到定量的目的。

HRM分析：

高分辨率溶解曲線是一種檢測基因突變、進(jìn)行基因分型和SNP檢測的新工具，可以迅速的檢測出不同樣本中單

個堿基的差異。HRM 檢測技術(shù)操作簡便，速度快，高通量，靈敏性好，特異性高，同時對試劑、儀器、軟件及經(jīng)驗

技術(shù)也提出了較高的要求。

檢測方法：

Sybr Green I 染料法：成本較低，并且可以通過溶解曲線發(fā)現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。

taqman 探針法：比染料法具有更高的特異性，但成本也相對較高。

其他：除以上兩種常用方法，我公司ROCHE 480 II還可以滿足Molecular beacon、LUX等其他多種方法的檢測。