對(duì)于NC膜的應(yīng)用技巧都在這里
更新時(shí)間:2021-09-14 | 點(diǎn)擊率:5605
酸纖維素膜(nitrocellulose filter membrane,簡(jiǎn)稱(chēng)NC膜),是蛋白印跡*泛使用的轉(zhuǎn)移介質(zhì),對(duì)蛋白有很強(qiáng)的結(jié)合能力,而且適用于各種顯色方法,包括同位素,化學(xué)發(fā)光(Luminol類(lèi))、常規(guī)顯色、染色和熒光顯色;背景低,信噪比高。在膠體金試紙中用做C/T線(xiàn)的承載體,同時(shí)也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處。NC膜是生物學(xué)試驗(yàn)中最重要的耗材之一。
NC膜的應(yīng)用技巧:
1. 蛋白與膜的結(jié)合原理
蛋白與膜的結(jié)合原理, 已知的結(jié)合力包括疏水作用力\H鍵\靜電作用力等,確切的結(jié)合原理并不明確,主要靠假說(shuō)來(lái)支撐。主要有兩種假說(shuō):
1)首先兩者靠靜電作用力結(jié)合,然后靠H鍵和疏水作用來(lái)維持長(zhǎng)時(shí)間結(jié)合。
2)首先兩者靠疏水作用結(jié)合,然后靠靜電作用來(lái)維持長(zhǎng)時(shí)間結(jié)合。
兩條假說(shuō),都表明其結(jié)合過(guò)程分為兩步,首先結(jié)合和后面長(zhǎng)時(shí)間結(jié)合。由于結(jié)合原理的不明確性,導(dǎo)致在這方面的工作非常依賴(lài)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。
2. 膜對(duì)結(jié)合的影響
1)膜孔徑
有些技術(shù)人員傾向使用膜孔徑來(lái)區(qū)分不同的膜,但是請(qǐng)注意這只僅僅限于同一廠家的產(chǎn)品,如果是不同廠家的產(chǎn)品,這種比較是無(wú)意義的。
膜孔徑與層析速度的關(guān)系,已在上文描述。隨著膜孔徑減小,膜的實(shí)際可用表面積遞增,膜結(jié)合蛋白的量也遞增。估量表面積的參數(shù)為表面積比率(實(shí)際可用表面積與所用膜平面積的比率)。另外,膜孔徑越小,層析速度也越小,那么金標(biāo)復(fù)合物通過(guò)T線(xiàn)的時(shí)間也就越長(zhǎng),反應(yīng)也就越充分。
綜合以上兩點(diǎn),結(jié)論為膜孔徑越小靈敏度越高。但是同時(shí)也減慢了跑板速度,增加了非特異性結(jié)合的機(jī)會(huì),也就是假陽(yáng)性越高.所以要按照試驗(yàn)結(jié)果挑選適合實(shí)際項(xiàng)目的膜,找到合適的平衡點(diǎn)。
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